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用户关注非洲猪瘟检测荧光定量PCR仪的哪些指标?

发布时间2019-04-01

截止目前,共有28个省份先后发生111起非洲猪瘟疫情,生猪扑杀量达数万,疫情形势复杂严峻,给生猪养殖业带来严重经济损失!

 

网友谈“猪”色变,到底啥是猪瘟?

顾名思义,“非洲猪瘟”早被发现并确诊是在非洲的肯尼亚,随后在安哥拉、南非、塞内加尔、苏丹、赞比亚等非洲陆续有报道。1957年开始在非洲以外的传播。

非洲猪瘟(African Swine FeverASF)是由非洲猪瘟病毒(AsfivirusASFV)引起的猪的一种急性、烈性、高度接触性传染病。该病严重危害着养猪业,动物卫生组织将其列为法定报告动物疫病之一。我国将非洲猪瘟列为一类动物疫病,是烈性外来疫病,其对生猪致病率高,致死率高达

 

疫情笼罩,应该如何应对?

20188月非洲猪瘟疫情在爆发以来,疫情已持续近6个月。日前,农业农村部印发《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2019)》。

众所周知,接种疫苗是预防传染病的有效手段。那么为什么不用疫苗防控非洲猪瘟呢?事实是目前外均没有用于预防非洲猪瘟的安全有效疫苗。非洲猪瘟疫苗研发成功短期内很难实现。

农业农村部畜牧兽医局有关负责人表示,诸多因素共同决定了非洲猪瘟防控工作的复杂性和长期性。

从有关处了解到,现在对于疫情区病猪,主要处理方式为扑杀,类似拨牙式消除病毒。一旦检出阳性病猪,无论大小全部挖坑深埋或者立即焚烧,且严禁运出疫区。健康未染病猪需经严格检测检疫,合格后方能逃过一劫,继续饲喂直到达标出售。那么问题来了,怎样判断生猪是否感染非洲猪瘟病毒?

 

非洲猪瘟如何检测?

1. 免疫学检测试纸条

201912日,农业农村部办公厅发布关于非洲猪瘟病毒检测试剂盒有关事宜的通知。通知规定可以使用农业农村部部批准或经动物疫病预防控制中心比对符合要求的检测方法及检测试剂盒(试纸条)进行猪瘟病毒检测。

此法主要原理为抗体与抗原结合,形成免疫复合物,通过试纸条产生特定颜色变化来判断样本是否具有猪瘟病毒。当待检样品中没有病毒抗体时,检测线则不显色,有病毒抗体时,产生颜色。

需要注意的是,试纸条检测虽然操作方便、成本低廉、简单快速,但敏感性不高,仅为70%,容易产生假阳性和假阴性,一旦漏检,将导致严重后果,对于疫情的控制非常不利。农业农村部规定,符合要求的猪瘟病毒试纸条在应急期间可使用至2019630日。显然,试纸条只是紧急疫情下的权宜之计,其准确性并不能满足实际检测需求。

2. 常规PCR检测

动物卫生与流行病学中心与动物疫病预防控制中心于去年8月编制了非洲猪瘟病毒检测操作试行规程。该规程从分子生物学角度出发,针对非洲猪瘟病毒核酸进行检测,主要方式为实时荧光PCR检测和常规PCR检测。

常规PCR检测过程:待检样品通过DNA提取试剂盒提取DNA。反应液制备完成后,每管加入提取的3μL DNA样本,进行PCR扩增。经过PCR扩增完成的产物进行琼脂糖凝胶电泳。电泳结束后进行拍照观察分析。此法扩增的ASFV VP72基因长度为257 bp。若被检样品电泳凝胶出现257 bp条带,则判断为ASFV阳性,否则,则视为阴性。

此检测方法灵敏度较试纸条检测高,两个小时内便能出结果。但是进行常规PCR检测需要配备PCR仪,相应的,也需要安全无污染的实验室条件。另一方面,PCR扩增产物需要进行电泳和手动荧光成像,后肉眼判断病毒基因是否具有扩增条带,所以对检测人员的专业水平要求较高。

3. 实时荧光PCR检测

实时荧光PCR检测过程:待检样品通过DNA提取试剂盒提取DNA。样本制备完成后,进行荧光定量PCR扩增。Ct值由实时荧光PCR仪软件自动确定。过程设置提取阳性对照(+)、提取阴性对照(-)、反应阳性对照(+)、反应阴性对照(-)4个对照。

相比常规PCR检测,实时荧光PCR检测法准确率高,可达97%。此法需要配置实时荧光PCR仪,这对中小型养殖场来说,是一笔不小的负担:一方面实时荧光PCR仪市场售价为10~50万,普通养殖场或检测中心难以承此负担;另一方面,实时荧光PCR仪操作需要专业的技术人员,通常操作人员为本科甚至硕士学历,而普通养殖场很难招聘到该类技术人员。

需要注意的是,尽管花费较高,实时荧光PCR法仍是目前猪瘟病毒检测使用率高的方法。


用户关注非洲猪瘟检测荧光定量PCR仪的哪些指标?

稳定性:稳定性包括数据稳定性,也指性能、指标稳定。稳定性低会导致数据结果可靠性下降,这对于疫情检测,尤其是应对大批量样本检测来说,仪器稳定性至关重要。

荧光通道:倾向于采购多通道实时荧光PCR仪。

价格:对于大型养殖场来说,配备PCR仪资金不成问题。但中小型生猪养殖场及检测机构由于经费受限,难以承担高昂的仪器采购费用。据业内人士透露,在其他条件符合预期的情况下,他们愿意采购10万以内PCR仪。

技术支持:这一点是各型养殖场的软肋。由于检测技术人员的严重缺失,各生猪养殖场亟需能够帮助指导生猪检测技术操作。若PCR仪厂商能够提供专业的仪器使用指导及售后支持,这将会是一大卖点。

因此,价格明显的国产实时荧光PCR仪将成为这些用户的。为此,小编与知名国产PCR仪供应商力新仪器市场经理李勇求证,他的回答也印证了这一点。据他介绍,受此次非洲猪瘟事件的影响,实时荧光PCR仪的销售增长显著。

 

说非洲猪瘟检测荧光定量PCR仪是应对猪瘟疫情的中流砥柱毫不为过。然而,即时、快速和准确的检测是广大养殖场和检测机构对检测仪器高的诉求。面对大规模爆发的烈性疫情,用户对便携、易操作、准确性高、成本相对低廉的检测设备需求为迫切。换句话说,现有仪器解决方案在满足非洲猪瘟病毒检测需求方面还有提升空间。比如前端预埋试剂的微流控芯片搭配后端qPCR仪检测,只要芯片价格能让用户负担得起,将是一个很好的产品组合。事实上,以微流控芯片作为耗材,搭配后端定量PCR的检测在临床检测领域已有成型产品。希望各大仪器厂商推出优检测产品,为此次疫情平息出一份力。